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實驗動物麻醉指南

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動物實驗中, 有效的麻醉不僅是保證實驗順利進行方法學上的關鍵環節, 也是保證實驗動物福利的一項基本要求。

如何根據科研目的采用合適的實驗動物并選擇恰當的麻醉藥物是順利進行動物實驗的重要前提。理想的麻醉應該既要保證實驗操作順利進行, 保證獲得的實驗數據準確可靠, 又要將實驗動物遭受的痛苦降至最低, 保證動物福利要求。

根據麻醉范圍主要分為全身麻醉和局部麻醉,全身麻醉又分為吸入麻醉和非吸入麻醉。

1. 全身麻醉:實驗動物一般較難合作,因此,實驗中常采用全身麻醉。

吸入麻醉:又稱為氣麻,將揮發性或氣體麻醉劑,由動物呼吸道吸入體內而產生麻醉效果。

非吸入麻醉:即注射麻醉,包括肌肉、腹腔、靜脈注射。

2. 局部麻醉:指通過麻醉藥阻斷機體某一部分的感覺神經傳導功能,而運動神經傳導保持完好或同時有程度不等的被阻滯狀態。

吸入式麻醉

麻醉藥以蒸氣或氣體狀態經呼吸道吸入而產生麻醉者,稱吸入麻醉。吸入法對多數動物有良好的麻醉效果,其優點是易于調節麻醉的深度和較快的終止麻醉,缺點是中、小型動物較適用,對大型動物如狗的吸入麻醉操作復雜,通常不用。

常用的吸入性麻醉劑有:異氟醚 Isoflurane、七氟烷 Sevoflurane、氟烷 Halothane

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注射式麻醉

注射麻醉是使用非揮發性全身麻醉藥進行麻醉的方法。大小鼠實驗中常用苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、水合氯醛和氯胺酮等麻醉劑,這些麻醉劑使用方便,一次給藥可維持較長的麻醉時間,麻醉過程較平衡,動物無明顯掙扎現象,但缺點是蘇醒較慢。

一般采用靜脈注射、腹腔注射、肌內注射等方法進行麻醉。兔、貓、犬、豬等大動物常采用靜脈注射、肌內注射的方法進行麻醉;小鼠、大鼠、豚鼠等小動物常采用腹腔注射(注射部位宜選在腹部后1/3處略靠外側,避開肝和膀胱)的方法。

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注意事項:

(1)靜脈注射必須緩慢,同時觀察肌肉緊張性、角膜反射和對皮膚夾捏的反應,當這些活動明顯減弱或消失時,立即停止注射。配制的藥液濃度要適中,不可過高,以免麻醉過急;但也不能過低,以減少注入溶液的體積。

(2)在使用麻醉藥過程中,隨時注意觀察動物的反應,尤其是采用靜脈注射時,絕不可將按體重計算出的用量匆忙進行注射。

(3)腹腔注射最主要的就是要針頭進入動物腹腔后,一定要注意回抽,否則極易將麻藥打到動物的胃腸道,引起胃腸道麻痹脹氣,動物常因此無法進入麻醉狀態,甚至死亡。

靜脈注射一般采用鼠尾靜脈或兔耳緣靜脈注射。正確找到注射的靜脈是很關鍵的。其次就是,當采用體重計算麻藥用量后,切不可匆忙注射,靜脈注射必須緩慢進行,一定要邊注射邊觀察動物的反應,如肌肉緊張度、角膜反應、抓捏反應等。

小鼠麻醉后務必進行麻醉深度的確認。若麻醉深度不夠則須延后實驗,.待達到麻醉深度后再進行實驗;或者考慮增加劑量使其達到麻醉深度。

麻醉由淺入深一般可以分為4個階段:

      誘導期:仍有主動動作,呼吸與心率增加,運動時步態不穩、后半身搖晃,后肢無力。

淺外科期:停止運動后呈側臥狀,置于仰臥后不能翻正。對非疼痛刺激物肢體動作反應,捏夾皮膚或刺激腳趾仍有收縮反射,呼吸規則以胸式呼吸為主,出現中等程度的肌肉松弛,眼瞼和角膜反射存在。

深外科期:呼吸頻率下降,呼吸規則以腹式呼吸為主,肌肉完全松弛,眼瞼反射消失、角膜反射微弱,對嚴重刺激都不引起有害反射。

脫離深外科期:四肢持續震顫、抽搐,全身肌肉開始收縮,由平坦仰臥狀轉為側臥蜷縮狀。

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簡單確認麻醉深度的方式:

        皮膚捏夾反應:用有齒鑷捏夾小鼠皮膚

        刺激腳趾反應:刺激小鼠腳趾或腳掌部位。

觀察小鼠是否有反應,若小鼠反應靈敏則說明麻醉過淺

局部麻醉

局部麻醉是用局部麻醉藥阻滯周圍神經末梢或神經干、神經節、神經叢的沖動傳導,產生局限性麻醉區。局部麻醉的特點是動物可保持清醒狀態,對重要器官功能干擾輕微,麻醉并發癥少,是一種比較安全的麻醉方法。

目前常用的局部麻醉劑有普魯卡因、利多卡因和丁卡因。

如下為這三類的比較:

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局部麻醉常用的方法是表面麻醉、浸潤麻醉、區域阻滯麻醉及傳導麻醉等。

表面麻醉:將穿透力強的局部麻醉藥直接作用于黏膜表面,使黏膜下神經末梢麻醉。可將藥物配成不同濃度的溶液、凝膠和糊劑,通過滴入、噴霧、涂布和灌注等方法將其應用到眼、口腔、鼻腔、喉、外耳道或尿道等黏膜處,產生麻醉。

浸潤麻醉和區域阻滯麻醉:沿手術切口線逐層注射局部麻醉藥或手術區周圍部位注射藥物,阻滯神經纖維而達到麻醉作用,前者稱為浸潤麻醉,后者稱為區域麻醉。適用于犬、貓皮膚撕裂窗縫合、皮膚疣及皮膚腫瘤的切除、幼犬截尾術和皮膚活組織的采集等。

【注】:局麻一般采用浸潤麻醉方法,操作時,動物固定好后,首先在局部皮膚用皮頭針先作皮內注射,形成橘皮樣丘疹,然后換成局部麻醉長針頭,由皮點進針,放射到皮點周圍繼續注射,直到要求麻醉區域的皮膚都浸潤為止;可以根據實驗操作要求的深度按照皮下、筋膜、肌肉、腹膜或骨膜的順序,依次注射麻藥,以達到麻醉神經末梢的目的。

局部麻醉雖然在動物實驗中用途不是很廣泛,但貓、犬等大動物在短時間的實驗中可能會使用局部麻醉的方法。

注意事項

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在動物手術過程中,如果臟器長時間暴露,應適當滴加溫性的生理鹽水,防止黏膜發干。

眼部周圍可以涂抹潤滑的眼膏,減少由于眼部干燥造成損傷。

麻醉后小鼠體溫調節機能被抑制,出現體溫下降。此時,常需要采取保暖措施,例如恒溫加熱毯、暖照燈等。還要注意每過10min左右翻身,防止血液沉積或肺葉的塌陷。

注意觀察小鼠的心率、呼吸頻率、眼球/尾部/耳朵的血管充盈程度等。

術后應提供無菌的籠具和舒適飼養環境,若術部的牽拉會阻礙小鼠飲水,應當在籠內放置無菌的果凍及輻照后的飼料供其食用。

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