經(jīng)過(guò)特定抗原處理過(guò)的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞融合的方法得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)HAT培養(yǎng)基篩選、ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率后得到陽(yáng)性克隆株，最后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)⒓?xì)胞注入到balb/c小鼠腹腔中用腹水培養(yǎng)，收集腹水純化后就能得到單克隆抗體。
小鼠單克隆抗體是最常見最經(jīng)典的單克隆抗體，經(jīng)過(guò)特定抗原處理過(guò)的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞融合的方法得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)HAT培養(yǎng)基篩選、ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率后得到陽(yáng)性克隆株，最后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)⒓?xì)胞注入到balb/c小鼠腹腔中用腹水培養(yǎng)，收集腹水純化后就能得到單克隆抗體。
鼠單抗制備流程：
1.抗原準(zhǔn)備：原核表達(dá)蛋白抗原，或者設(shè)計(jì)合成多肽并偶聯(lián)KLH。選擇原核表達(dá)蛋白抗原的客戶，可自己提供純化好的抗原（純度>85%），也能為你純化蛋白，從構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒，到獲得純化蛋白。
2.抗原免疫：免疫4只balb/c小鼠，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)程序加強(qiáng)免疫，尾部采血進(jìn)行ELISA檢測(cè)，驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)為血清ELISA>10,000。
3.細(xì)胞融合和篩選：顯示最佳免疫應(yīng)答的balb/c小鼠，將其脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，通過(guò)HAT選擇性培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞。
4.雜交瘤細(xì)胞篩選：有限稀釋法對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選，對(duì)2-5個(gè)陽(yáng)性母細(xì)胞進(jìn)行亞克隆，并選一個(gè)亞克隆做亞型鑒定。
5.單克隆抗體大量制備：選擇一個(gè)陽(yáng)性克隆腹腔注射到5只balb/c小鼠進(jìn)行腹水生產(chǎn)。
6.單克隆抗體純化：使用ProteinA/G純化抗體，并用ELISA檢測(cè)抗體效價(jià)。
我們的優(yōu)勢(shì)：
1.能夠提供常規(guī)的蛋白、多肽抗原的單克隆抗體制備外，我們也擅長(zhǎng)小分子抗原的單克隆抗體制備，對(duì)于農(nóng)藥、小分子、重金屬抗原的偶聯(lián)和免疫。
2.抗原優(yōu)質(zhì)多樣：原核表達(dá)的重組蛋白，純度≥95%，濃度可達(dá)5mg/mL，可溶性好，模擬天然蛋白狀態(tài)。使用專有抗原表位預(yù)測(cè)軟件篩選設(shè)計(jì)多肽序列，抗原免疫效果好。
3.專業(yè)的抗體篩選和純化技術(shù)：有Protein A/G純化抗體技術(shù)，也有抗原特異性親和純化技術(shù)，任你選擇！
4.從事抗體生產(chǎn)和定制服務(wù)，我們專業(yè)！我們承諾，單克隆抗體ELISA效價(jià)達(dá)到1：64,000以上。對(duì)于任何宿主、任何蛋白抗原（純度>85%）的單克隆抗體服務(wù)保證Western blot檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性。
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