目的 觀察不同濃度黃芪多糖( Astragalus polysaccharides, APS) 通過(guò)干預(yù)肺轉(zhuǎn)移前微環(huán)境( Premetastatic niche, PMNs)對(duì) HIF-1 和 S100A8 / A9 蛋白的影響,初步闡明 APS 對(duì)肺 PMNs 中的作用靶點(diǎn)及對(duì)腫瘤肺轉(zhuǎn) 移影響的分子機(jī)制。
方法 SPF 級(jí) C57BL/ 6J 小鼠 90 只,除空白組外,其余 75 只用熒光素酶(LUC)標(biāo)記的 Lewis 肺癌細(xì)胞 1 × 10 6 個(gè)通過(guò)小鼠尾靜脈注射構(gòu)建 PMNs 模型,并隨機(jī)分成 5 組:模型組、低劑量組(灌服黃芪多糖 50 mg / kg)、中劑量組(灌服黃芪多糖 100 mg / kg)、高劑量組(灌服黃芪多糖 200 mg / kg)、芬戈莫德(FTY720)組(腹腔 注射 FTY720 1 mg / kg),每組 15 只。 觀察不同濃度黃芪多糖對(duì) PMNs 中 HIF-1 和 S100A8 / A9 蛋白的影響,同時(shí)用 小動(dòng)物活體成像及 HE 染色評(píng)估肺部轉(zhuǎn)移情況。 接種瘤細(xì)胞次日后低、中、高各劑量組按劑量灌胃給藥,每天 1 次, 共 28 d。 FTY720 通過(guò)腹腔注射每 2 d 1 次間隔給藥。 在前 14 d 通過(guò)小動(dòng)物活體成像動(dòng)態(tài)觀察肺腫瘤轉(zhuǎn)移情況,并 在第 14 天每組隨機(jī)取出 5 只采用 Western Blot 及 RT-qPCR 技術(shù)檢測(cè)多功能蛋白聚糖、纖維連接蛋白和賴(lài)氨酰氧化 酶等在腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境中具有標(biāo)志性的蛋白進(jìn)一步驗(yàn)證模型成功。 在第 28 天取肺組織采用蘇木精-伊紅(HE) 染色觀察小鼠肺組織病理學(xué)改變,并采用 Western Blot 及 RT-qPCR 技術(shù)檢測(cè) 28 d 所取的肺組織中 HIF-1 和 S100A8 / A9 蛋白和基因的表達(dá),取材前 12 h 禁食不禁水。
結(jié)果 HE 染色觀察小鼠肺組織發(fā)現(xiàn),與空白組相比模型 組小鼠肺組織中出現(xiàn)大面積肺泡壁增厚和粒細(xì)胞浸潤(rùn),并出現(xiàn)少量腫瘤轉(zhuǎn)移灶;與模型組相比,高劑量組和 FTY720 組小鼠的腫瘤轉(zhuǎn)移灶點(diǎn)明顯減少,肺組織趨于正常。 RT-qPCR、Western Blot 檢測(cè)結(jié)果顯示:與空白組比較, 模型組小鼠肺中 HIF-1,S100A8,S100A9 基因和蛋白表達(dá)顯著升高(P < 0. 05);而與模型組相比,FTY720 組和 APS 各組上述蛋白和基因表達(dá)均下降(P < 0. 05)。
結(jié)論 黃芪多糖可通過(guò)調(diào)控肺腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境中 HIF-1、S100A8、 S100A9 的表達(dá)水平減少腫瘤細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移。
閱讀原文：黃芪多糖對(duì)肺腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境中HIF-1和S100A8╱A9蛋白表達(dá)及肺轉(zhuǎn)移的影響.pdf
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